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細胞株開發的主要過程要知道

原載自:m.xrpalvh.cn[技術資料頻道]  2022-10-14  瀏覽次數:1168

   細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養細胞中獲得具有特殊性質或標志物的細胞。一般認為,細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。
  細胞株開發是抗體藥物CMC的起點和基礎,細胞株的好壞直接決定生產成本、工藝復雜度和產品質量,開發穩定細胞株的過程包括:
  宿主細胞的選擇,表達載體的構建與轉染,單克隆化以及高表達細胞株的篩選。目前大部分的抗體藥物都是選用的CHO細胞,但原始CHO細胞系流轉到不同的實驗室和公司,經過不同的培養、馴化、改造和重新克隆后形成了不同種類的CHO細胞系。這些不同CHO細胞系之間的形態、生長、表達、代謝,甚至基因組都有較大差異。宿主細胞的選擇除了考慮研發周期、成本以及后期整體的生產成本,還需要有清晰的歷史背景信息。
  表達載體的構建和轉染開始是指將表達抗體的目的基因構建到載體上,再將該載體轉染進入宿主細胞內。常用于哺乳動物細胞轉染的方法有磷酸鈣法、陽離子脂質體法、病毒轉染法和電穿孔法。沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗,需要根據細胞類型和實驗進行選擇。理想的方法應具有高轉染效率、低細胞毒性和對正常生理學的影響小,并且易于使用和具有可重復性等特點,所以在正式開展轉染實驗前還要做多項預試驗,優化轉染條件。
  篩選高表達單克隆細胞株是細胞株構建的關鍵步驟,衡量標準包括抗體表達量、產品的純度、翻譯后修飾、代謝穩定性等。常用的篩選克隆的方法包括:有限稀釋法、流式細胞儀分選法、半固體培養基篩選法等。

 

 

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