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細(xì)胞株的增殖檢測(cè)技術(shù)探討

原載自:m.xrpalvh.cn[行情動(dòng)態(tài)]  2021-10-15  瀏覽次數(shù):895

   細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物,也就是說(shuō),細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱(chēng)為有限細(xì)胞株;如果可連續(xù)傳代,稱(chēng)為連續(xù)細(xì)胞株。對(duì)于人類(lèi)腫瘤細(xì)胞,在體外培養(yǎng)半年以上,生長(zhǎng)穩(wěn)定的并連續(xù)傳代的即可稱(chēng)為連續(xù)性株或系。
  細(xì)胞株應(yīng)用MTT比色法,可檢測(cè)其存活和生長(zhǎng)狀況。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞內(nèi)線粒體中的琥珀酸脫氫酶能催化外源性無(wú)色的MTT形成藍(lán)色的結(jié)晶Formazan,并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的Formazan,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在一定波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。
  該方法現(xiàn)已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)、以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。
  相關(guān)項(xiàng)目如下:
  1.細(xì)胞接種:用戶(hù)收到細(xì)胞后,用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞,得出細(xì)胞懸液濃度。計(jì)算出應(yīng)稀釋的倍數(shù),按MTT試劑盒要求在96孔板內(nèi)接種相應(yīng)濃度的細(xì)胞懸液;
  2.細(xì)胞培養(yǎng):在無(wú)菌恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)接種好的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板,并實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài);
  3.藥物處理并呈色:按不同濃度梯度加入藥物作用細(xì)胞;
  4.溶解、比色:加入MTT檢測(cè)試劑,按操作要求孵育相應(yīng)時(shí)間,在酶標(biāo)儀內(nèi)檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出比色結(jié)果。

 

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