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離體培養(yǎng)ATCC細胞系

原載自:m.xrpalvh.cn[行情動態(tài)]  2016-06-27  瀏覽次數(shù):1933

   離體培養(yǎng)ATCC細胞系一般要參考該種動物的體溫設計培養(yǎng)時所用溫度。通常哺乳動物的體溫在37-38.5°C,禽類略高些,溫度在39°C-40°C。因此,離體哺乳動物ATCC細胞系培養(yǎng)的溫度zui適為37-38.5°C。在較低溫度環(huán)境中,對ATCC細胞系影響不大,但細胞系對較高溫度卻比較敏感。
  ATCC細胞系生長、繁殖的zui適條件是它們在機體內所處的條件,但如將組織、細胞系從機體內取出,讓其在離體條件下生存,那就必須模擬機體的環(huán)境。然而機體畢竟是太復雜了,所以在體外只能保證ATCC細胞系生長,繁殖所需要的zui基本因素,現(xiàn)簡單介紹這些因素的作用。
  1.培養(yǎng)基(液):ATCC細胞系培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基主要是人工合成的。通常其主要成分含有氨基酸、維生素、糖類、無機鹽、生長因子和其他的輔助物質。當然不同的組織和ATCC細胞系對培養(yǎng)基成分的要求有所不同,因而進行培養(yǎng)時應區(qū)別對待,為其選擇zui適條件的配方。配制時應注意以下幾點:
  (1)水是ATCC細胞系生命活動的重要因素之一,細胞系培養(yǎng)用的各種液體都要用水配制。由于有毒物質和元素等即使含量很低也能引起細胞系培養(yǎng)的失敗,所以ATCC細胞系中所用的水必須經(jīng)過高度的純化。通常使用的是三次蒸餾水或去離子水。
  水質的好壞可用電導儀檢測其電阻值,即水中離子的導電狀況,越低的水含離子越少,電阻值也越高。一般以25°C時的歐姆(W)/cm表示。ATCC細胞系培養(yǎng)用水的電阻值一般選用100萬歐以上的去離子水為宜。
  (2)無機離子既是維護ATCC細胞系生命所需要的成分,而且對維持一定的滲透壓、緩沖和調節(jié)溶液的酸堿度等方面都起著重要的作用。所以在配制ATCC細胞系培養(yǎng)液時,必須根據(jù)這幾方面的需要,加入必需的一些無機鹽類。就多數(shù)動物來說,所需的無機鹽類有Na+,K+,Ca2+,Mg2+,Cl-,碳酸鹽,磷酸鹽等。它們彼此之間常保持一定的比例。破壞了這種關系,就會使培養(yǎng)的ATCC細胞系受到損害。
  (3)血清是ATCC細胞系培養(yǎng)液中的重要成分之一。血清中含有豐富的營養(yǎng)物質,如蛋白質和核酸等,血清不僅為細胞系的生長提供所必需的營養(yǎng),還具有促生長能力。血清對ATCC細胞系附著和生長均有明顯的促進作用,并能中和有毒物質的毒性,使細胞系不受到損傷。用于細胞系培養(yǎng)的血清來源是多種的,如人血清、馬血清、兔血清等。zui常用的是牛血清。一般講動物愈年輕,其血清愈有利于細胞系生長,故成年牛血清不如犢牛的好。ATCC細胞系培養(yǎng)中所用血清的質量會直接影響到細胞系生長的狀況。
  (4) pH值對細胞系生長有影響。來源不同的細胞系,由于它們處于有機體的不同部位或器官,其所處外環(huán)境的pH值也不相同,所以在培養(yǎng)ATCC細胞系時,應參考該ATCC細胞系在機體內所處外環(huán)境的pH值配置適宜pH培養(yǎng)基(液)。一般以中性為好,剛開始培養(yǎng)的哺乳動物的細胞系,pH在7.0左右較好,貼壁生長的細胞系在pH7.2-7.4生長,以不超過pH6.8-7.6為宜。高于或低于此限度時,往往會引起細胞系死亡。在ATCC細胞系培養(yǎng)過程中,必須注意培養(yǎng)液pH值改變與細胞系生長的關系,找出規(guī)律。在pH值變得不適于ATCC細胞系生長時,應及時更換新的營養(yǎng)液。

 

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