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ATCC細胞細胞破碎方法

原載自:m.xrpalvh.cn[行情動態]  2016-11-02  瀏覽次數:1352

   ATCC細胞通過在支持物(如蓋玻片)上培養貼壁細胞,可以應用抗體檢測細胞表面抗原的表達或進行酶細胞化學以及免疫細胞化學檢測。該方法的優點是細胞貼壁牢固,能夠維持細胞生長時的狀態
  ATCC細胞細胞破碎:
  1、高速組織搗碎:將材料配成稀糊狀液,放置于筒內約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調速器先撥至zui慢處,開動開關后,逐步加速至所需速度。此法適用于動物內臟組織、植物肉質種子等。
  2、ATCC細胞細胞破碎玻璃勻漿器勻漿:先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎,此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,適用于量少和動物臟器組織。
  3、超聲波處理法:用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂,此法多適用于微生物材料,用大腸桿菌制備各種酶,常選用50-100毫克菌體/毫升濃度,在1KG至10KG頻率下處理10-15分鐘,此法的缺點是在處理過程會產生大量的熱,應采取相應降溫措施。對超聲波敏感和核酸應慎用。
  4、反復凍融法:將ATCC細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復幾次,由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎。
  5、化學處理法:有些動物細胞,例如腫瘤細胞可采用十二烷基磺酸鈉(SDS)、去氧膽酸鈉等細胞膜破壞,細菌細胞壁較厚,可采用溶菌酶處理效果更好。
  無論用哪一種方法破碎組織細胞,都會使細胞內蛋白質或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導致天然物質量的減少,加入二異丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酥活力,但不是全部,還可通過選擇pH、溫度或離子強度等,使這些條件都要適合于目的物質的提取。
  高等生物是由多細胞構成的整體,在整體條件下要研究單個細胞或某一群細胞在體內的功能活動是十分困難的。但是如果把活細胞拿到體外培養進行觀察和研究,則要方便得多。活細胞離體后要在一定的條件下才能存活和進行活動,特別是高等動植物細胞要求的生存條件極其嚴格,稍有不適就要死亡。所以細ATCC細胞培養技術就是選用適當生存條件對活細胞進行培養和研究的技術。

 

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